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  四军医大首次构建成永生化胚胎肝细胞系 【注册男护士专用博客】          

四军医大首次构建成永生化胚胎肝细胞系

www.nanhushi.com     佚名   不详 

  第四军医大学唐都医院感染病中心李羽博士等采用脂质体转染法,在国内首次构建成功一株“永生化胚胎肝细胞系”。该细胞系的建立,为生物人工肝及肝细胞移植的临床应用,提供了理想的细胞材料和崭新的思路。

  据介绍,原位肝移植是治疗肝功能衰竭的惟一有效手段,但由于技术复杂、价格昂贵,特别是供肝短缺等原因,使其临床应用受到限制。生物人工肝及肝细胞移植,虽可作为一种有效的替代手段,却也因细胞材料量少的问题而受到影响。因此,加强肝细胞移植材料的研究已成为人们关注的热点。

  为探讨肝功能衰竭治疗材料来源的新方法,李羽博士等研究人员采用脂质体转染法,将SV40T基因和真核表达载体pcDNA3.1,转染至体外分离培养的人胚胎肝细胞,再通过G418培养液筛选、传代培养、细胞克隆及基因整合等一系列技术处理,在40天后终于克隆出一株具有原代肝细胞特征的永生化胚胎肝细胞系。

  经检测,该细胞系原代胚胎肝细胞存活率达91%。体外培养48小时后,可见80%贴壁,细胞呈椭圆形,核仁增大,胞内含有丰富的糖原颗粒,细胞极性恢复,可见毛细胞管重建,细胞克隆形成率为31.2%。经染色体核型分析,第16、28、45代肝细胞各计数30个分裂相,均为正常二倍体细胞,染色体为23对,核型结构与正常人肝细胞相同。免疫组化检测证实,SV40T基因已整合入胚胎肝细胞,该永生化肝细胞已具备合成白蛋白的能力,提示克隆的永生化胚胎肝细胞株不仅构建成功,而且其重组质粒、细胞形态及染色体核型等各项功能指标良好。

  研究人员认为,利用脂质体转染法建立的该永生化胚胎肝细胞系,特征明显,增殖较快,克隆形成能力强,没有恶性转化,具备了原肝细胞的典型形态特征和正常肝细胞的某些功能,为肝细胞体外长期培养以及功能维持提供了可能,从而使其成为理想的细胞材料,给生物人工肝及肝细胞移植的临床应用奠定了基础。



 

文章录入:杜斌    责任编辑:杜斌 
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